脂肪含量高低是衡量飼料質(zhì)量和營養(yǎng)價值高低的重要指標之一，因此脂肪測定早已成為飼料常規(guī)分析項目。目前飼料中脂肪測定多依據(jù)《飼料中粗脂肪的測定》GB/T6433—2006，該標準等同采用了國際標準 ISO 6492：1999 《動物飼料中粗脂肪含量的測定》，并且與1994 版的主要差異是增加了水解方法。多數(shù)植物性飼料中的油脂非常容易用石油醚等直接提取出來，但對于動物性飼料和經(jīng)過膨化、制粒等熱處理的飼料，有一部分脂肪呈結(jié)合態(tài)，因此要想獲得準確的總脂肪含量，需要先進行酸水解預處理，然后再進行提取。對于這些樣品，如果不經(jīng)過水解，脂肪測定結(jié)果會大大低于實際含量。

由于現(xiàn)行國家標準 GB/T6433—2006 中增加了水解方法，如何準確有效操作成了大家所關心的問題。如果按照標準中所描述的步驟，非常繁瑣且不容易準確掌握、操作，難以確保數(shù)據(jù)的準確性和重復性。目前不僅企業(yè)的化驗員，即使是檢測機構(gòu)的專職檢測人員也覺得不好把握。如何根據(jù)現(xiàn)行標準的原理，尋找一種簡捷而可靠的測定方法是從事飼料分析人員在實際工

作中迫切需要的。本文著重介紹一種目前在歐美廣泛使用的濾袋法，來快速測定飼料中

粗脂肪和總脂肪，并對測定結(jié)果與傳統(tǒng)方法進行比較評價。

1 濾袋法測定飼料中的粗脂肪

1.1 適用范圍

該方法適用于GB/T6433—2006 《飼料中粗脂肪的測定》中定義的A 類樣品，即除B 類樣品以外的所有動物飼料。B 類樣品主要包括：純動物性飼料，包括乳制品；脂肪不經(jīng)水解不能提取的純植物性飼料，如谷蛋白、酵母、大豆及馬鈴薯蛋白以及熱處理的飼料（如制粒、膨化等）；含有一定數(shù)量加工產(chǎn)品的配合飼料、濃縮飼料，其20% 脂肪來自加工產(chǎn)品。

張麗英，中國農(nóng)業(yè)大學國家動物營養(yǎng)重點實驗室，博士，教授，100193，北京圓明園西路 2 號。

隋連敏、楊文軍，單位及通訊地址同第一作者。收稿日期2009-11-20

1.2 方法提要

將試樣103 ℃ 條件下烘干，然后用石油醚等在一定溫度條件下進行提取，提取前后試樣質(zhì)量減少部分占試樣質(zhì)量百分比即為試樣中粗脂肪含量。

1.3 儀器設備

分析天平：精度0.1 mg。干燥箱：溫度控制（103± 2）℃。脂肪提取儀：ANKOM XT15，工作溫度（90±2）℃。濾袋：ANKOM XT14，孔徑1μm。封口機、干燥器，記號筆：耐酸和其他溶劑。

1.4 測定步驟

    ①將標記好的濾袋放在天平上，并回零；②稱取0.75~1.0 g 試樣置于濾袋中，記錄質(zhì)量（m）；③用封口機在離濾袋上沿約4 mm 處完全熱封，冷卻2 s；④將濾袋置于103 ℃條件下干燥3 h，干燥結(jié)束，快速從干燥箱中取出來放入干燥器中，冷卻至室溫并記錄質(zhì)量（m）；⑤將濾袋擺放在脂肪分析儀的樣品架上，每批可以放15 個（包括空白濾袋），然后將其放入脂肪分析儀的缸體內(nèi)。按照脂肪分析儀屏幕指示操作，設定時間60 min，溫度90 ℃；⑥測定結(jié)束，取出帶濾袋的樣品支架，并將濾袋置于103 ℃干燥箱中干燥 1 h；⑦將濾袋放入干燥器中冷卻至室溫,并稱重（m3）。

1.5 結(jié)果計算

試樣中粗脂肪含量按照公式（1）計算。

式中：m1—試樣質(zhì)量，g；

      m2—浸提前烘干后試樣+濾袋質(zhì)量，g；

      C1—浸提前空白袋干燥后質(zhì)量，g；

      C2—脂肪提取后空白袋干燥后質(zhì)量，g；

      m3—浸提后樣品+濾袋烘干后質(zhì)量，g。

2 濾袋法飼料中總脂肪的測定

2.1 適用范圍

本方法適用現(xiàn)行 GB/T6433—2006 《飼料中粗脂肪測定》中所規(guī)定的 B 類樣品（見本文 1.1 部分）。

2.2 方法提要

首先將試樣用鹽酸溶液水解，釋放結(jié)合態(tài)油脂，然后用石油醚等溶劑在一定溫度條件下進行提取。提取前后試樣質(zhì)量減少部分占試樣質(zhì)量百分比即為試樣中總脂肪含量。

2.3 儀器設備

    鹽酸水解系統(tǒng)：ANKOM HCI,溫度控制（90±2）℃。硅藻土：用6 mol/l 鹽酸溶液消煮30 min，然后用水沖洗至中性，并在 130 ℃烘箱中干燥，備用。其他同粗脂肪測定。

2.4 試劑與溶液

石油醚：沸點 40~60 ℃。鹽酸溶液：3 mol/l。

2.5 測定步驟

①將標記好的濾袋放在天平上，并回零；②當試樣中脂肪含量超過20%，需要在濾袋中先稱取0.5~1 g 硅藻土，并回零；③稱取 0.75~1.0 g 試樣置濾袋中，記錄質(zhì)量（m），每個袋中的硅藻土和試樣干燥后的質(zhì)量不能超過 1.5 g；④用封口機在離濾袋上沿4 mm 處完全熱封，冷卻2 s，然后搖動濾袋，使試樣和硅藻土混合均勻；⑤將試樣放入鹽酸水解系統(tǒng)的樣品架上，每批可以放15 個（包括空白濾袋），然后將其放入水解系統(tǒng)的缸體內(nèi)，加3 mol/l 鹽酸溶液500 ml，并按照儀器屏幕指示操作，設定時間60 min，水解溫度90 ℃，水淋洗20 min；⑥當水解結(jié)束，將濾袋連同支架一起從水解系統(tǒng)中取出來，鋪平濾袋，在兩層吸水紙之間輕輕擠壓，以除掉濾袋中殘存的水；⑦將濾袋置于 103 ℃ 條件下干燥箱中干燥3 h，干燥結(jié)束，快速從干燥箱中取出來放入干燥器中，冷卻至室溫并記錄質(zhì)量（m）；⑧將濾袋擺放在脂肪分析儀的樣品架上，每批可以放15 個（包括空白濾袋），然后將其放入脂肪分析儀的缸體內(nèi)，按照脂肪分析儀屏幕指示操作，設定時間60 min，溫度90 ℃；⑨測定結(jié)束，將濾袋取出來，置于103 ℃干燥箱中干燥1 h；⑩干燥結(jié)束，將濾袋放在干燥器中冷卻至室溫，并稱重（m3 ）。

2.6  結(jié)果計算

試樣中總脂肪含量按照公式（2）計算。

總脂肪（％）=

式中：m1—試樣質(zhì)量，g；

      m2—水解后試樣+濾袋+硅藻土烘干后質(zhì)量，g；

      C1—水解后空白袋干燥后質(zhì)量，g；

      C2—脂肪提取后空白袋烘干后質(zhì)量，g；

      m3—浸提后樣品+濾袋烘干后質(zhì)量，g。

3 結(jié)果比較與評價

3.1 與傳統(tǒng)方法比較

濾袋法與傳統(tǒng)方法飼料中脂肪測定結(jié)果比較見表1。由表1可以看出，所比較的10 種飼料原料或產(chǎn)品，其脂肪含量覆蓋范圍比較寬，最低不到0.5%，最高則超過 40%，但無論脂肪含量高與低，濾袋法與傳統(tǒng)方法測定結(jié)果相同或非常接近。

3.2聯(lián)合實驗結(jié)果

    濾袋法已經(jīng)獲得美國油脂協(xié)會（AOCS）的批準（AOCS Approved Procedure Am 5-04）。表2 為 AOCS組織的聯(lián)合實驗結(jié)果。由表2 可以看出，選用了 7 種典型飼料原料和產(chǎn)品作為比對樣品，參加實驗室數(shù)量為10~12 個。采用濾袋法全體實驗室結(jié)果平均值與有資質(zhì)實驗室采用AOCS Official Methods Ba 3-38, AOAC 920.39 或其他公認方法測定結(jié)果平均值相同或非常接近，并且有比較好的重復性和再現(xiàn)性。

（參考文獻若干篇，刊略，需者可函索）（編輯：張學智，[email protected]）